Przegląd

EGFR jest najczęściej testowanym czynnikiem czynnym w nie-małokomórkowym raku płuc, ale jeden test rzadko mówi całą historię.Panel wykrywania EGFR z 5 miejscami DdPCR przesłuchuje pięć miejsc o znaczeniu klinicznym G719S, T790M, L858R, L861Q i usunięcie egzonu 19 – przy użyciu cyfrowej kropelkowej PCR, techniki zbudowanej w celu znalezienia mutacji o bardzo niskim zawartości, których konwencjonalne sekwencjonowanie nie może przeoczyć.W tym artykule wyjaśniono biologiczne właściwości każdego z nich., dlaczego T790M ma znaczenie po terapii TKI pierwszej linii i jak cyfrowa wrażliwość PCR zmienia monitorowanie oporności.

Pierwotne mutacje aktywacyjne: L858R i usunięcie egzonu 19

L858R w egzonie 21 i delecja egzonu 19 to dwie najczęstsze mutacje aktywujące EGFR, odpowiadające za większość chorób wrażliwych na TKI.DdPCR zapewnia szybkie potwierdzenie u pacjentów rozpoczynających leczenie pierwszej liniiWykrycie w krążącym nowotworze DNA umożliwia również śledzenie odpowiedzi na leczenie: spadek frakcji alleli zmutowanych sugeruje kontrolę choroby,natomiast wzrastający może ostrzec o postępie przed wykonaniem obrazu.

T790M i TKI pierwszej linii

T790M jest klasycznym mechanizmem nabytej oporności na EGFR TKI pierwszej i drugiej generacji.i jego obecność zmienia zarządzanieInhibitory trzeciej generacji są standardowym następnym krokiem, ponieważ działają na klony zawierające T790M.Wyzwaniem jest to, że klon jest często obecny w niskiej frakcji w krążącym DNA guza w trakcie postępuCyfrowa PCR dzieli DNA na tysiące kropli i liczy pozytywne zdarzenia, wykrywając kopie poniżej rozdzielczości rutynowych metod.

Dlaczego G719S i L861Q zasługują na własne pierwsze

G719S (ekson 18) i L861Q (ekson 21) są rzadziej występującymi wariantami EGFR, ale nie są one biologicznie nieistotne.w niektórych przewodnikach grupuje się je w kategoriach związanych z leczeniemWłączenie ich do pięciopunktowego panelu wyświetla rzadkie warianty, które w przeciwnym razie mogłyby zostać pominięte, gdyby tylko klasyczne punkty gorące zostały przetestowane, poszerzając użyteczność kliniczną bez poszerzania skali pełnego genu.

Wysoka wrażliwość na oporność o niskiej zawartości

Największym argumentem na rzecz DdPCR w monitorowaniu oporności jest wrażliwość analityczna.i klon odporności może przyczynić się tylko do niewielkiego ułamka całkowitejCyfrowa kropla PCR toleruje to tło znacznie lepiej niż metody masowe, ponieważ każda kropla jest niezależną reakcją, więc rzadkie mutacje są liczone zamiast średniej.Wynikiem jest wcześniejsze wykrycie nowego oporu..

Częste pytania

P: Dlaczego T790M jest najważniejszym miejscem na tym panelu?Odpowiedź: T790M jest najczęstszym mechanizmem nabytej oporności na EGFR TKI pierwszej i drugiej generacji.Wykrycie go w niskim stężeniu wspiera przejście na inhibitor trzeciej generacji aktywny przeciwko nowotworom noszącym T790M..

P: Jak DdPCR wykrywa mutacje, które sekwencjonowanie może pominąć?Odpowiedź: DdPCR dzieli próbkę na tysiące kropli i liczy pozytywne reakcje indywidualnie, ilościowo określając nisko zmutowane frakcje zakopane w dzikim tle krwi.

P: Czy G719S i L861Q są traktowane tak samo jak L858R i 19del?Odpowiedź: Nie. Niezwykłe odmiany nadal reagują na niektóre TKI, ale są podzielone na grupy wytycznych, więc ich włączenie zapobiega brakowi rzadkich czynników leczniczych.

P: Jakiego rodzaju próbki wykorzystuje ten panel DdPCR EGFR?Odpowiedź: Zazwyczaj stosuje się go do plazmy ctDNA w celu nieinwazyjnego monitorowania, chociaż DNA tkankowe może być również przesłuchiwane.