Przegląd

Opracowane w laboratorium testy immunohistochemiczne (IHC) PD-L1 oparte na króliczym przeciwciałem monoklonalnym E1L3N firmy Cell Signaling Technology (CST) są szeroko stosowane tam, gdzie nie jest wymagany zatwierdzony przez organy regulacyjne diagnostyk towarzyszący. Użyteczność kliniczna jakiegokolwiek wyniku PD-L1 załamuje się, jeśli barwienie różni się między instrumentami, partiami lub operatorami. Dla dystrybutorów i zespołów ds. zaopatrzenia laboratoriów referencyjnych, argument handlowy za E1L3N opiera się na powtarzalności międzyplatformowej, kalibracji w stosunku do klonów referencyjnych oraz architekturze kontroli jakości CAP/CLIA, która utrzymuje zgodność między laboratoriami w określonych granicach.

Kalibracja platformy i zgodność między instrumentami

Klon E1L3N wiąże się z wewnątrzkomórkową domeną C-końcową PD-L1, dlatego łatwiej toleruje różne protokoły utrwalania i odzyskiwania niż niektóre przeciwciała N-końcowe. Jednak sam klon nie gwarantuje spójności; wynik jest produktem przeciwciała, chemii detekcji i instrumentu. Testy oparte na E1L3N wymagają zatem specyficznej dla platformy miareczkowania w celu ustalenia optymalnego rozcieńczenia i okna odzyskiwania antygenu na każdym autostainerze, a laboratoria uruchamiające E1L3N na wielu platformach muszą wykazać, że progi TPS i komórek nowotworowych są zgodne.

Zgodność przy klinicznie istotnych progach, takich jak TPS 1% i 50%, jest główną metryką, ponieważ niewielkie odchylenie w pobliżu granicy decyzyjnej może zmienić kwalifikowalność pacjenta. Wiele laboratoriów porównuje E1L3N z testami referencyjnymi 22C3 i 28-8 na dopasowanych mikromacierzach tkankowych; ogólna zgodność powyżej 90% jest punktem odniesienia.

Architektura kontroli jakości CAP/CLIA

Utrzymująca się spójność międzyplatformowa nie jest jednorazowym zdarzeniem walidacyjnym; jest to ciągła dyscyplina egzekwowana przez CAP i CLIA. Laboratorium musi zablokować zmienne przedanalityczne — czas utrwalania formaliny, grubość preparatu i odzyskiwanie antygenu — ponieważ E1L3N, podobnie jak wszystkie klony PD-L1, jest wrażliwy na nadmierne i niedostateczne utrwalanie. Kontrole na preparacie ze znanym wysokim, niskim i negatywnym wyrazem są uruchamiane z każdą partią, aby zweryfikować, czy barwienie odzwierciedla rzeczywisty wyraz, a nie dryf.

System jakości wymaga również testowania biegłości, weryfikacji partia-do-partii każdego nowego wsadu przeciwciała oraz zdefiniowanych polityk dotyczących czasu realizacji i ponownego testowania. CLIA ustanawia podstawową kompetencję; CAP dodaje inspekcję wzajemną i badania biegłości. Dla kupujących, dostawca, który przejrzyście publikuje swoją macierz walidacyjną, sygnalizuje program jakości wystarczająco solidny, aby obronić wyniki PD-L1.

Często zadawane pytania

P: Czy klon E1L3N jest zamienny z diagnostykami towarzyszącymi 22C3 lub 28-8? O: Nie automatycznie. E1L3N jest przeciwciałem opracowanym w laboratorium, które musi zostać zwalidowane w stosunku do referencji, zanim wyniki będą mogły kierować decyzjami klinicznymi. Po odpowiedniej kalibracji wykazuje wysoką zgodność z 22C3 i 28-8.

P: Jakiego poziomu zgodności należy oczekiwać między E1L3N na dwóch różnych platformach IHC? O: Silne programy dążą do ogólnej zgodności powyżej 90% przy klinicznie istotnych progach TPS wynoszących 1% i 50%. Drobne odchylenia w środkowym zakresie są dopuszczalne, jeśli nie przekraczają granic decyzyjnych.

P: Dlaczego CAP/CLIA wymaga kontroli na preparacie w każdym uruchomieniu PD-L1? O: Barwienie PD-L1 jest wrażliwe na zmienność utrwalania i odzyskiwania. Kontrole na preparacie ze znanym wysokim, niskim i negatywnym wyrazem wychwytują dryf proceduralny w czasie rzeczywistym, więc wynik można ufać tylko wtedy, gdy jego kontrole uruchomieniowe zachowują się zgodnie z oczekiwaniami.

P: Czy akredytacja CAP gwarantuje, że nasze wyniki E1L3N będą zgodne z wynikami laboratorium referencyjnego? O: Akredytacja CAP zapewnia, że laboratorium przestrzega zdyscyplinowanych procesów i przechodzi badania biegłości, co silnie koreluje ze zgodnością między laboratoriami. Nie gwarantuje identycznych liczb, ale znacząco zwiększa prawdopodobieństwo zgodnej klasyfikacji.